细胞株构建服务
全面的基因调控细胞株构建服务
基因编辑技术
CRISPR/Cas9系统通过导向RNA（sgRNA）引导Cas9核酸酶靶向特定基因组位点，产生DNA双链断裂，进而通过细胞的DNA修复机制——非同源末端连接（NHEJ）或同源定向修复（HDR）——实现对目标基因的精确编辑。在此基础上发展出的多种衍生技术进一步拓展了基因编辑的应用边界：
转录调控系统（CRISPRa/CRISPRi） 将失去核酸酶活性的dCas9与转录激活结构域（如VP64、p65）或转录抑制结构域（如KRAB）融合，在sgRNA引导下靶向特定基因的启动子区域，实现对目标基因表达水平的可逆性上调或下调，而不改变基因组序列本身。
表观遗传修饰系统（Epigenome Editing） 将dCas9与DNMT3A或TET1等表观遗传修饰酶融合，实现对特定基因组区域DNA甲基化或去甲基化状态的定向改写，其修饰效应具有可遗传性，能够在细胞分裂后持续维持。
碱基编辑器（Base Editor） 通过将胞嘧啶或腺嘌呤脱氨酶与Cas9切口酶融合，在不产生DNA双链断裂的前提下实现单碱基的精确转换。
先导编辑器（Prime Editor） 通过将逆转录酶与Cas9切口酶融合，结合经过改造的pegRNA，实现目标序列的精准替换、插入或删除。
基因编辑细胞及其应用
基因编辑细胞株是功能基因组学研究的基础工具，通过在特定细胞系中引入预设的基因修饰，研究者能够在受控的遗传背景下解析基因功能、筛选药物靶点、构建疾病模型，并评估基因治疗策略的可行性。
- 基因功能研究 在特定细胞背景下系统解析基因的生物学功能，建立基因型-表型的因果关联。
- 药物靶点发现与验证 通过基因敲除或调控构建靶点验证细胞模型，评估靶点干预的生物学效应。
- 疾病模型构建 引入致病突变或关键基因修饰，构建肿瘤、遗传病等疾病相关的细胞模型。
- 基因治疗策略评估 在细胞水平评估基因编辑或基因治疗策略的有效性。
- 合成致死靶点筛选 构建特定基因缺陷的细胞株，为合成致死策略的药物筛选提供实验体系。
基因调控类型与技术服务
| 调控类型 | 技术路线 | 交付标准 | 交付周期（预估） |
|---|---|---|---|
| 基因敲除（KO） | CRISPR/Cas9系统质粒/慢病毒/RNP转导 | 单克隆，Sanger测序确认移码/片段缺失 | 8-14周 |
| 内源激活（CRISPRa） | dCas9-SAM系统慢病毒转导 | 混合克隆，qPCR确认靶基因转录上调 | 8-12周 |
| 内源抑制（CRISPRi） | dCas9-KRAB系统慢病毒转导 | 混合克隆，qPCR确认靶基因转录下调 | 8-12周 |
| 定点突变 | HDR模板+CRISPR敲入策略 | 单克隆，Sanger测序确认突变序列 | 12-20周 |
| 定点甲基化 | dCas9-DNMT3A融合系统慢病毒转导 | 混合克隆，亚硫酸盐测序确认甲基化状态 | 8-14周 |
| 定点去甲基化 | dCas9-TET1融合系统慢病毒转导 | 混合克隆，亚硫酸盐测序确认去甲基化状态 | 8-14周 |
| 常规过表达 | 过表达载体慢病毒转导 | 混合克隆，qPCR确认mRNA过表达 | 6-10周 |
| 常规干扰 | shRNA慢病毒转导 | 混合克隆，qPCR确认靶mRNA敲低水平 | 6-10周 |
服务流程
方案评估
→ 载体设计与构建
→ 细胞转导
→ 阳性细胞富集/单克隆筛选
→ 基因编辑事件验证
→ 扩增与质量控制
→ 交付
技术路线的可行性需结合基因位点和细胞类型确定。具体方案需技术沟通确认。
